Description Produit

Ce kit complet et robuste d'amplification d'ARNm a été optimisé pour utiliser 50ng à 1µg d'ARN total comme matériel de départ. Ce kit peut générer 5 à 50 µg d'ARNm amplifiés prêt pour être marqués. Il peut être utilisé en combinaison parfaite avec le Kit d'extraction d'ARN total et celui de marquage ''Amino Allyl''.

Référence	Désignation
MAK	MiniAmp mRNA Amplification Kit (10 reactions)

Spécifications Techniques & Protocole

Equipements nécessaires

• Ethanol 100%
• Ethanol 70%
• Glace pour les incubations
• Tubes PCR
• Thermocycler
• Microcentrifugeuse réfrigérée allant jusqu’à 10 000 rpm ou plus
• Micropipettes
• Vortex
• Homogénéiseur (si travail avec des tissues)
• Bain-marie ou bain à sec

Contenance du Kit

Articles	Conditionnement	Stockage
Enzyme Mix 1	16.5µl in 0.5ml tube	-20oC Freezer
RT Booster (enhancer solution)	50µl in 0.5ml tube	-20oC Freezer
Reaction buffer 1	50µl in 0.5ml tube	-20oC Freezer
dNTP Mix	40µl in 0.5ml tube	-20oC Freezer
DTT	50µl in 0.5ml tube	-20oC Freezer
Primer 1 Mix	11µl in 0.5ml tube	-20oC Freezer
Primer 2	11µl in 0.5ml tube	-20oC Freezer
Primer 3	22µl in 0.5ml tube	-20oC Freezer
Primer 4	11µl in 0.5ml tube	-20oC Freezer
Enzyme Mix 2	11µl in 0.5ml tube	-20oC Freezer
Reaction Buffer 2	150µl in 0.5ml tube	-20oC Freezer
DNA Binding Buffer	1.1ml in 2ml tube	Room Temp
DNA Wash Buffer Concentrate	0.5ml in 8ml bottle	Room Temp
DNA Micro Column	10	Room Temp
Elution Tube (1.5ml)	10	Room Temp
2 ml Wash Tube	10	Room Temp
Nuclease Free Water	1.5ml in 2ml tube	-20oC Freezer
Enzyme Mix 3	22µl in 0.5ml tube	-20oC Freezer
NTP Mix	79.2µl in 0.5ml tube	-20oC Freezer
Reaction Buffer 3	22µl in 0.5ml tube	-20oC Freezer
DNAse	11µl in 0.5ml tube	-20oC Freezer
Sodium Acetate Solution	50µl in 0.5ml tube	-20oC Freezer
Linear Acrylamide	20µl in 0.5ml tube	-20oC Freezer

Protocole court

1. Centrifuger brièvement tous les tubes avant utilisation.
2. Réaliser la synthèse du 1er brin d’ADNc.
3. Réaliser la synthèse du 2nd brin d’ADNc.
4. Amplifier l’ADNc double brin.
5. Purifier l’ADNc double brin.
6. Réaliser in vitro la transcription de l’ADNc double brin avec la T7 ARN polymerase.
7. Purifier l’ARN amplifié (ARNa).
8. Réaliser la synthèse d’ADNc à partir de l’ARNa en utilisant des aminoallyl dNTP marqués.

Nous consulter pour plus d'information sur le protocole complet.